
MCP-1与NF-κB在大鼠阿霉素肾病肾小球硬化中的作用
【摘要】 目的 探讨MCP-1与NF-κB在阿霉素肾病肾小球硬化中的表达及意义。方法 将24只8~10周龄雄性Wistar大鼠随机分为两组,正常对照组及肾病组。肾病组行右侧肾切除手术,1周后尾静脉注射0.1%阿霉素5mg/kg,正常对照组行假手术,注射等量的生理盐水。注药8周后留取血、尿标本,分别处死每组各12只大鼠,取肾组织行病理及电镜检测,并用免疫组化方法检测肾组织的MCP-1、NF-κB表达。结果 肾病组大鼠出现肾小球硬化、肾小管萎缩、间质淋巴及单核细胞浸润和纤维化;肾小球MCP-1、NF-κB表达上调,且与尿蛋白定量、肾小球硬化指数显著相关。结论 大鼠阿霉素肾病中,MCP-1、NF-κB表达上调可能参与阿霉素肾病肾小球硬化的发生。
在肾小球硬化的发生发展过程中,外周血单核细胞浸润于肾小球具有极为重要的意义,但其浸润机制不太明确。单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattract antprotein-1,MCP-1)是对单核/巨噬细胞有趋化、激活双重作用的趋化因子。核因子kappa B(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种具有多向性调节作用的核转录因子,它可诱导与免疫和炎症有关的多种基因转录,如MCP-1。本实验观察大鼠阿霉素肾病肾小球硬化模型组织中MCP-1、NF-κB表达及其与尿蛋白量、肾小球硬化之间的关系,探讨其在肾小球硬化发病机制中的作用,为临床防治肾小球硬化提供部分实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物分组和模型建立 Wistar大鼠24只大鼠随机分为2组:正常对照组、肾病组。肾病组的大鼠实行右侧肾切除手术,1周后尾静脉注射0.1%阿霉素5mg/kg,正常对照组为假手术组,只暴露右侧肾脏不做切除,同时1周后尾静脉注射等量的生理盐水。
1.2 检测指标及方法
1.2.1 血、尿及肾组织标本留取 用药8周后处死所有大鼠,收集尿液,血液及肾组织标本。
1.2.2 尿蛋白及血生化指标 比浊法测定24h尿蛋白定量,全自动生化分析仪测定血肌酐、尿素氮。
1.2.3 肾组织MCP-1、NF-κB的表达 免疫组织化学检测,用SABC法(MCP-1羊多克隆抗体,NF-κB兔多克隆抗体,SABC试剂盒购自天津博士德生物技术有限公司),以PBS代替一抗作为阴性对照。免疫组化结果分析:采用北京航空学院图像分析软件对各肾组织切片进行分析,显微镜下观察、照相,用彩色图像分析系统采集图像进行吸光度扫描,每张切片采集6个视野,每个视野采集6个肾小球,计算其平均光密度。
1.3 统计分析 所有数据经6.12版SAS软件包进行分析,计量资料用(均数±标准差)表示,用t检验和简单相关分析进行统计学处理。
2 结果
2.1 各组大鼠尿蛋白及肾功能的变化 肾病组大鼠尿蛋白明显增多,血肌酐、尿素氮增高,与正常对照组相比差异有显著性P<0.05(见表1)。
表1 各组大鼠尿蛋白及肾功能的变化的改变 (略)
注:与对照组相比, ˇ P<0.05
2.2 各组大鼠肾组织形态学变化 电镜下肾病组肾小球脏层上皮细胞足突广泛融合。光镜下肾病组肾小球囊腔扩大,肾小球毛细血管充血,系膜细胞及系膜基质增多;间质大量淋巴及单核细胞浸润,多灶状间质纤维化;肾小管腔内蛋白管型多见,部分肾小管萎缩;可见肾小球内节段性硬化及全球性硬化。计算每只大鼠肾组织50个肾小球中发生节段硬化或全球硬化的肾小球构成比作为硬化指数,结果对照组为0.04±0.02,肾病组为0.41±0.08。
2.3 各组大鼠肾组织中的MCP-1和NF-κB的表达结果 MCP-1免疫组化阳性信号主要位于胞浆内。核因子NF-κB阳性信号主要在细胞核,呈棕黄色。肾病组的肾小球MCP-1、NF-κB表过明显高于对照组,且两组比较差异有显著性(P<0.05)(见表2)。
表2 各组大鼠肾小球MCP-1、NF-κB表过(平均光密度)的比较(略)
注:与对照组相比, ˇ P<0.05
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